鱼类体细胞育种

发表时间:2021/02/23 19:17:40  浏览次数:1407  
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鱼类体细胞育种对鱼类体细胞进行修饰、诱变并筛选,培育出具有预定目的基因的体细胞系,以此细胞系为育种材料育成可繁殖后代的个体。

体细胞潜能

体细胞育种取决于体细胞系能否发育成性成熟的鱼。有人将体外培养的成蛙的皮肤、肝、心、肺、淋巴等细胞的细胞核植入去核的成熟蛙卵中,结果仅能获得摄食期前后的蝌蚪。因此认为,成体化的体细胞核发生了某些不可逆转的变化,只具有遗传的多能性;有些基因不可能表达,遗传上不具全能性。20世纪70年代,英国戈登(Gurdon)将爪蟾经培养的摄食蝌蚪的肠上皮细胞核移植入爪蟾的去核成熟卵中,获得成熟个体。因此,有些学者又认为,体细胞核具有遗传的全能性,细胞分化并未发生不可逆转的变化。80年代初,中国用鲫囊胚细胞的继代培养细胞、短期培养肾细胞及尾鳍细胞的细胞核连续移植获得了成鱼。证明鱼类已分化的体细胞核具有发育的全能性。为在细胞水平上进行各种遗传操作与加工、筛选、分离各种突变体细胞进行育种提供了依据。

细胞融合

鱼类细胞融合是鱼类细胞工程的一个重要组成部分。它可以把两个遗传特性各异的体细胞融合成一个细胞,从而建立一个具有特异性状的细胞系;也可以借助融合的方法获得多倍体的细胞系。

早期,哺乳类的细胞融合都采用仙台病毒作为融合剂。现代大多采用分子量为400~1000左右的聚乙二醇(PEG)。二甲亚矾(DMSO)能显著提高聚乙二醇诱导鱼类细胞的融合效率。在45%PEG-400中加入最终浓度为10%的DMSO,融合率可提高22%;在45%PEG-1000中,最终浓度为10%的DMSO可提高融合率14%。电脉冲引起细胞膜破裂进而诱发细胞融合的方法已在植物及动物细胞中获得成功。这种电融合的方法也可能成为鱼类细胞融合的重要手段。激光诱导鱼类卵细胞融合也有成功的报道。

细胞克隆和筛选

用单细胞显微操作法把单个细胞分别接种于96孔或24孔的微量培养板的培养孔内进行培养,每个微孔生长出的细胞称为一个细胞克隆。因是由单个细胞分裂繁殖而来,同一个克隆的所有细胞的遗传特性是高度同一的。把一个细胞克隆再进行培养的细胞就称为亚克隆或次级克隆。

克隆培养液为加有“三抗”和20%小牛血清的TC-199。在TC-199培养液中加入谷氨酰胺或维生素B6后,克隆率可提高到20%;加入条件培养液或用小鼠脾细胞作饲养层后,克隆率可高达30%左右。采用非鲫细胞作饲养层,一般可使克隆率达到50%以上,最高可达92%。

有了大量的细胞克隆,即可对其进行诱变处理,同时可对这些克隆进行遗传分析和筛选出具有目的基因(如抗性基因等)的细胞克隆,作为体细胞育种的原始材料。

试管鱼

或称细胞工程鱼。由于作为供体的体细胞首先是在试管或微孔培养板中培养的,因此由这种体细胞核发育出来的鱼就称为试管鱼。世界上第一尾试管鱼是1980年中国科学院水生生物研究所研究人员用囊胚细胞的继代培养细胞(53~59代)发育而成的鲫。继后1982年和1984年又分别获得鲫肾培养细胞和金鱼肾培养细胞的试管鱼。试管鱼的培养成功,为在细胞水平上进行遗传操作与加工,为鱼类体细胞育种开辟了一条新途径,也为缩短育种周期创造了条件。

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