2种消毒液对副溶血弧菌杀菌及抑菌效果试验

支建道，王鑫磊，吴凌晨，薛晖，赵彦华*

（1.南通闪水生物科技有限公司，江苏 南通 226000；2.江苏省淡水水产研究所，江苏 南京 210017）

副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）属于弧菌科，弧菌属，为既嗜盐又嗜温的革兰阴性短杆菌，在海产品中大量存在，能够感染多种水生动物，引起水生动物疾病，对水产养殖行业造成危害。副溶血弧菌也作为海产品相关食源性致病菌引起广泛关注。研究表明，副溶血弧菌是一种人与水产养殖动物共染的病原菌，尤其是在南美白对虾养殖过程中广泛存在。携带特异性质粒的副溶血弧菌是引起南美白对虾急性肝胰腺坏死病暴发的主要原因。

近年来，针对虾源副溶血弧菌开展了较多研究。有研究发现，感染副溶血弧菌的南美白对虾临床上呈现食欲减退、大量伏于岸边、体色由青转微红的症状，解剖可见肝胰脏肿大，胃肠无内容物，且传播及死亡率较高，一旦发病，2～3 d可全部死亡。为了解副溶血弧菌对南美白对虾养殖的危害，选取2种杀菌消毒液，开展了其对副溶血弧菌的杀菌效果及对南美白对虾养殖池塘的抑菌效果的试验。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株

从南美白对虾中分离的菌株于实验室-80℃冰箱内保存。

1.1.2 消毒液

选取2种消毒液，分别为1和2。消毒液1主要成分为次氯酸，由南通闪水生物科技有限公司提供；消毒液2主要成分为过氧化氢，由瑞士SANOSIL公司提供。

1.1.3 培养基及试剂

LB营养肉汤培养基、TCBS琼脂培养基平板、TCBS液体培养基及无菌生理盐水均由广州环凯生物技术有限公司提供。

1.1.4 试验设备

超净工作台SW-CJ-1F（苏净安泰），37℃电热恒温培养箱DHP-9162（上海一恒），恒温摇床Innova 42R（艾本德）。

1.2 方法

1.2.1 菌株复苏及纯化

将含有菌液的冻存管在室温下解冻，加入LB营养肉汤培养基，37℃恒温培养24 h；接种环划线接种于TCBS培养基，37℃恒温培养24 h；再次挑取蓝绿色单菌落划线接种于TCBS培养基；重复试验3次后，挑选蓝绿色单菌落接种于TCBS液体培养基，37℃恒温培养24 h，备用。

1.2.2 菌悬液制备

将含菌TCBS培养液，4℃离心，弃上清液，加入无菌生理盐水，混匀离心，弃上清液，反复3次后，加入无菌生理盐水制成菌悬液并计数，于4℃冰箱保存备用。

1.2.3 消毒液试验浓度

消毒液试验浓度设置见表1。

表1 消毒液配制浓度

1.2.4 杀菌试验

吸取1 mL菌悬液，加入1号无菌管中，2—8号无菌管中各加入900μL无菌生理盐水，从1号管中吸取100μL菌悬液加入2号管中，依次倍比稀释，至第7管后弃去，第8管不加入；随后每管中加入100μL的0.050 mg/L消毒液1，混匀后静止24 h后，吸取500μL加入TCBS培养基内，37℃恒温培养24 h，观察有无细菌生长。同样的试验方法对消毒液1其余浓度及消毒液2所有浓度进行试验，记录试验结果。

1.2.5 抑菌试验

试验在南通某南美白对虾养殖场3个南美白对虾养殖池塘内开展，使用无菌器具取池塘水并编号（1号—3号）。每个塘口设试验组2组和对照组1组，其中试验组分别加入消毒液1和消毒液2，使得最终浓度分别为0.005和1.000 mg/L；对照组不添加。37℃恒温放置24 h，测细菌总数并记录。

2 结果与分析

2.1 菌悬液计数

副溶血弧菌菌悬液计数为2.81×10CFU/L。

2.2 杀菌效果

消毒液1和消毒液2对副溶血弧菌的杀菌结果分别见表2和表3。当副溶血弧菌浓度为2.81×10CFU/L时，消毒液1最低杀菌浓度为0.005 mg/L，消毒液2最低杀菌浓度为1.000 mg/L。

表2 消毒液1#杀菌结果①

表3 消毒液2#杀菌结果①

2.3 抑菌效果

消毒液对南美白对虾养殖池塘的抑菌结果见表4。消毒液1和消毒液2在最低浓度杀灭副溶血弧菌的同时，对池塘水的细菌总数有明显的抑制作用。

表4 消毒液抑菌效果