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鲤浮肿病毒研究进展与病原生物学特征、分子流行病学、流行特点和研发展望

鲤是全球养殖最广泛的鱼类，也是水产养殖中最具经济价值的品种之一。据统计，2016年我国鲤养殖产量350万吨，占淡水鱼类养殖总产量的 12.4%。锦鲤是鲤的变种，在欧洲、日本和我国同样具有重要市场价值。锦鲤疱疹病毒病（Koi Herpersvirus Disease，KHVD）、 鲤春病毒血症（spring viremia of carp，SVC）以及鲤浮肿病（Carp edema virus disease，CEVD；或称锦鲤昏睡病，Koi sleepy disease，KSD）是目前鲤和锦鲤的3种重要病毒病，给世界各国鲤和锦鲤养殖业造成重大经济损失。目前 鲤春病毒血症(简称SVC，下文同)和锦鲤疱疹病毒病(简称KHVD，下文同)已有较多研究报道，在我国2016年的阳性检出率分别为 9.3%和1.8%。

(发病鱼鳃丝局部溃烂，图源：腾氏水产；作者：唐绍林 王娟 雷燕 席云清)

2016年我国首次报道发现鲤浮肿病毒（简称CEV，下文同），近两年我国河南、河北和云南等多个省份检出CEV，CEV在我国的流行情况和经济损失情况比SVC和KHVD严重，河南省每年由CEV导致的经济损失达到5000万元，亚太水产养殖中心（NACA）于2017年将 CEV 列入亚太区域水生动物疫病监测名录。本文就国内外对CEV的病原生物学特征、引起的临床症状、流行特点、检测技术及防控等内容的研究进行了综述，旨在为该病的预防与控制提供参考。

(发病鱼鳃丝肿胀，粘液增多，图源：腾氏水产；作者：唐绍林 王娟 雷燕 席云清)

1　病原生物学特征

鲤浮肿病毒(CEV)属于痘病毒科（Poxviridae），是线性双链DNA（dsDNA）病毒。目前已知痘病毒科分为脊椎动物痘病毒亚科和昆虫痘病毒亚科2个亚科。而CEV属于未定亚科的痘病毒，大小约为200nm×400nm。痘病毒虽是 DNA病毒，但其增殖过程全部在细胞质内进行。通过透射电镜观察，CEV在鳃的上皮细胞胞浆中，表面平整，呈圆形或卵圆形；衣壳蛋白均匀覆盖在肾样病毒核心周围。CEV在电镜下也可呈类似桑葚形，并有囊膜。

(鳃丝棍棒化有明显粘连现象，图源:科学养鱼，作者:陈昌福)

2　临床症状

感染CEV的鲤或锦鲤行动迟缓，常聚集在池塘的水面或边缘处，或静置在池塘中，或在池底不动，倒向一侧，呈沉睡状态。当受到触动时，病鱼会游动，但很快又继续处于昏睡状态 。病鱼临床表现为烂鳃、体表糜烂、出血、皮下组织水肿、眼球凹陷、食欲不振、吻端和鳍的基部溃疡等。

在感染CEV的鲤或锦鲤中，最常见症状是包括烂鳃在内的鳃丝损害症状。低倍镜观察发现，鳃组织上皮细胞的过度增殖导致了鳃丝肿胀；高倍镜下表现出鳃细胞水肿、重度增生、鳃小片相互融合以及上皮细胞脱落。鳃丝末端细胞增生会严重影响到血液的气体交换，导致鱼出现缺氧、浮头、反应迟缓和代谢紊乱等现象，因而推测鳃组织的病理变化可能是导致鱼最终缺氧死亡的主要原因 。通过qPCR已证实，鳃组织CEV的病毒载量显著高于肾、脾、表皮和肠腔等组织。

(病鱼身体浮肿的症状，图源:科学养鱼，作者:陈昌福)

CEV与KHV感染均具有烂鳃和眼凹陷等相似症状，且仅导致鲤或锦鲤发病死亡，因而养殖者经常把CEV感染误认成KHV。因此，在养殖生产中，当鲤或锦鲤出现烂鳃等症状且死亡率高时，应同时进行KHV和CEV的PCR 或qPCR检测，以确定病原。此外，CEV拷贝量与临床症状、发病死亡情况不一定成正比。

(病鱼鳃丝挂脏，图源作者：孙中亮、康岳华)

3　流行特点

3.1　易感品种

鲤和锦鲤的不同品种对CEV易感程度不同。研究表明，不同品系鲤感染 CEV后表现出不同临床症状，其中锦鲤和捷克地方鲤（Přerov scaly carp，PS）临床症状最为明显，而黑龙江野鲤（Amur wild carp，AS）对 CEV最不易感。目前在我国养殖的锦鲤和松浦镜鲤均已检出CEV。其他品系鲤对CEV的敏感程度尚不清楚，需要进一步开展流行病学调查和研究工作。

(患鲤浮肿病的锦鲤肛门病变)

3.2　发病的环境条件

Miyazaki 等认为水温是影响 CEV 的重要环境因子。研究发现，在 15~25 ℃水温下锦鲤感染CEV 后发病，幼鱼的累积死亡率可高达 75%~100%。在较高温度下，最初鱼表现昏睡，2~3 d 后出现大量死亡。在较低水温（6~10 ℃）下，CEV感染病程较长且死亡率较低 。据现场调查，我国河南等地的 CEV 发病时间有 2 个高峰，分别是5—6 月和 9 月。这 2 个季节水温一般在 20~27 ℃，推测这可能是我国 CEV 传播的最适水温，但有待进一步研究确定。综合国内外资料，CEV 在 6~27℃水温范围内均有检出，发病温度范围较宽，提示水温可能并不是该病暴发的关键因素。

3.3　传播方式

未感染的鲤与已感染CEV的锦鲤同居6h后可检测到CEV，证实病毒可以在锦鲤和鲤之间水平传播，感染 7d 后鲤开始出现典型症状和死亡。带病苗种流通以及展览比赛等是 CEV 快速大范围传播的主要原因。CEV 是否存在垂直传播途径还有待证实。

3.4　分布范围

1974 年， 日本首次在新泻县锦鲤中发现CEV，之后在广岛市和琦玉县等地区均有发现CEV 报道。由于该病很长一段时间以来只在日本流行，因此各国对 CEV 重视不够，有关其疫情报道很少。但近年来 CEV 报道病例迅速增加（表 1），荷兰还从已经归档的 2004 年样品中检出 CEV，推测 CEV 在上述地区早有发生，但当时由于各种原因未得到有效确认。

2014年7月，北京市房山区某养殖场锦鲤幼鱼暴发疫病，死亡率约 80%。病鱼出现烂鳃、体浮肿等临床症状，后确诊为 CEV 感染。这是我国首次报道发现 CEV 感染。经调查 2017 年对河南省养殖鲤（包括锦鲤）造成重大危害的“鲤急性烂鳃病”主要病原为 CEV。2017 年本实验室对全国 9 个省市的 97 家鲤和锦鲤养殖场进行了CEV检测，发现养殖场阳性率为 52%。2013—2015 年波兰监测的36 个鲤和锦鲤养殖场中有16个场检出CEV，场阳性率为45%，与我国CEV阳性率接近。由此可见，CEV 在国内外分布较广，对我国鲤和锦鲤养殖业具有重大危害。

(鲤鱼浮肿病毒病临床症状，左图：眼睛凹陷，烂鳃，鳃丝挂脏；右图：鳃丝局部溃烂。图源作者：孙中亮、康岳华)

4　分子流行病学

现阶段对CEV的结构基因组尚不可知，只有部分基因编码序列 P4a用于分子流行病学研究。通过对已经公布的 CEV 4a 核酸序列分析发现，CEV各毒株间的突变率高于6%，提示CEV存在至少2个，甚至3个基因组或谱系。Matras 等把目前发表的P4a 基因序列进行了系统发育分析，将CEV划分为I和II2个基因型，其中II基因型又分为IIa和IIb基因型。研究表明，CEV基因型与宿主种类有明显关系，即IIa基因型主要感染锦鲤和鲤，而I和IIb基因型仅分离于鲤。目前我国各地检出的CEV毒株主要属于IIa基因型。

(晴天病鱼在下风口上浮、聚堆。图源：利洋水产)

5　检测方法

5.1　取样部位与取样时间

由于鳃组织为CEV的主要靶器官，在检测CEV时应单独取鳃组织，制样检测。调查表明，CEVD一般持续发病 7~10d，之后再取样检测常为阴性。本实验室人工感染试验也证实，在发病和死亡停止后鱼体内的病毒量逐渐降低到0，提示鱼可能对CEV产生了免疫力。因此在CEV监测时，最好抽取正在发病的鱼或尚未发病的鱼；如果取到病愈的鱼，极易得到假阴性结果，从而造成漏检。

(患鲤浮肿病的锦鲤鳃丝)

5.2　检测方法

5.2.1　光学显微镜和透射电镜观察　由于 CEV 感染所致的鳃组织病理变化与感染KHV、细菌或寄生虫发生的病理变化相似，不具有特异性，因此仅能作为疑似病例判定依据。电镜观察鳃组织中成熟病毒粒子也是一种检测方法，但由于电镜设备昂贵、制样和观察需要较高技术等限制，目前该方法仅适用于首次病例的发现或科研。

5.2.2　病毒分离

截至目前仍没有筛选到能易感CEV的细胞系。有研究发现，CEV 能够在鳃来源的原代细胞中复制。因此，急需构建对 CEV 敏感的细胞系，以此作为 CEV 检测和深入研究的突破口。

5.2.3　分子生物学检测方法

PCR检测技术是CEV的主要检测手段。Oyamatsu设计的套式引物从具有 CEVD 症状的锦鲤样品中检出CEV，但后续发现此方法存在漏检情况。英国环境、渔业和水产养殖科学中心（Centre for environment，fisheries and aquaculture science，CEFAS）设计了另一套式 PCR 和 qPCR 的引物。其中，套式PCR依然存在漏检情况，而qPCR是目前较适合开展监测的技术方法。qPCR和传统的套式PCR具有相似检测灵敏度，其组织检出限为1~10copies/反应或4~40copies/mg。曹欢等建立了CEV的 LAMP检测方法，最低可检出6copies/µL，具有较高的特异性和检测灵敏度。Soliman 等采用重组酶聚合酶扩增技术（Recombinase polymerase amplification，RPA），建立了快速鉴别诊断鲤和锦鲤CEV和KHV的新方法，其最低检出限与PCR 检测方法相似。

5.2.4　CEVD 诊断

对CEVD的诊断，应采用流行特点、临床症状以及分子生物学检测相结合的方法，即当同池鱼仅鲤或锦鲤发病死亡，有烂鳃、凹眼和昏睡等症状时，qPCR或套式PCR或LAMP检测CEV阳性时，可判定为CEV感染。

(病鱼体表有大量灰白色粘液。图源：利洋水产)

6　预防和控制措施

6.1　抗病育种

感染实验表明，AS对CEV感染表现出较强抵抗力且无明显CEV感染症状，提示可通过培育或引进抗病品种，选育对 CEV不易感的品种，以减少CEV感染风险。

6.2　监测、检疫和隔离

苗种带毒扩散是许多地区 CEV 流行蔓延的一个主要因素，因此在引入苗种时需进行严格的隔离检疫，在15~25 ℃至少进行30d。锦鲤展会也会增加疫病传播风险，建议参展锦鲤隔离养殖，避免通过混养造成CEV广泛传播，运回的参展锦鲤也需要隔离。对养殖场，尤其是苗种场定期开展CEV监测，一旦发现阳性需及时处置。

(患病鱼体躯干部肌肉外露形成溃疡病灶，图源:科学养鱼，作者:陈昌福)

6.3　应急措施

目前对CEVD没有有效治疗措施。日本学者建议对已出现CEVD临床症状的鲤或锦鲤进行0.5%浓度的盐浴，但这并不能根除CEV。在0.5%盐水中鲤应激反应较低，CEV 增殖能力减弱。对于已经确认发生CEVD的养殖场，不要采取滥用药物、换水或加药调水、倒池等引起应激反应的措施，应及时捞取死鱼，注意增氧，停止投喂饵料。一般CEVD发病 7~10d后，死亡现象会自然停止。

6.4　预防

CEVD发病前养殖场普遍存在换水、倒池、水质突变、天气突变和鱼药使用等情况，有的养殖场在发病后滥用各种鱼药，导致鱼进一步大规模死亡，而在发病后不用或少用药的养殖场，鱼死亡率反而较低。因此，养殖场应提高养殖管理水平，发病前后避免滥用药，减少鱼体应激。这也是防控CEVD 和降低损失的有效措施。

(病鱼眼睛内陷，有的鱼烂鳃。图源：利洋水产)

7　展望

目前对CEV的易感宿主、流行病学和发病机制等认识尚浅，使得CEV对我国水生动物的影响很难得到准确评估。对CEV基因组结构及其编码蛋白的功能、抗原性、敏感细胞系的建立等基础研究方面也还存在许多空白。而这些领域的研究进展有助于病毒分离纯化、检测技术优化等，以及深入研究工作。

CEV的检测尚无统一标准，需尽快建立特异、敏感、快速、适宜现场诊断的方法，尽快构建敏感细胞系。目前对于 CEV 还没有特效预防药物，因此研制高效 CEV 疫苗已成为亟待解决的问题。

（来源：中国动物检疫2018年第35卷第5期）

（作者：吕晓楠，徐立蒲，王姝，王静波，王小亮，曹欢，张文，潘勇，江育林。北京市水产技术推广站）

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