催产激素对尼罗罗非鱼人工繁殖效果的研究

魏继海，赵永华，王燕，岳蒙蒙，赵金良*

(上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室，上海 201306)

根据催产激素注射后前期血清类固醇激素的水平变化，筛选了尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)最佳催产激素组合。为了进一步验证该催产激素组合的生产效果，在尼罗罗非鱼繁殖生产期间进行人工催产试验，观察催产后144h内实际含卵雌鱼比例与催产效应时间，并从卵子形态变化方面观察催产效应。结果显示：水温21～29℃时，催产试验组平均获产率为57.5%，对照组平均获产率为27.5%，试验组的平均获产率显著高于对照组(P<0.05)；试验组含卵时间集中在72h内，对照组含卵时间比较分散；催产后72h，试验组50%雌鱼卵子发育达到成熟期，对照组仅30%。试验结果为尼罗罗非鱼全人工繁殖生产提供了参考依据。

尼罗罗非鱼；人工催产；催产激素；获产率

尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)原产于非洲，具有生长快、养殖周期短、群体繁殖能力高、适应性强等特点，目前已成为我国重要的淡水养殖鱼类之一[1]。尼罗罗非鱼是一年多次产卵型鱼类，性腺发育非同步性，自然繁殖容易[2]，但人工繁殖比较困难，主要是很难获得成熟卵，这也影响了罗非鱼相关研究工作的深入开展[3-4]。目前，国内外对罗非鱼催产激素种类研究较少[5-7]，李建平等[8]对奥利亚罗非鱼(O.aureus)进行了人工繁殖试验，催产激素为DOM和LRH-A2，雌鱼催产剂量为4mg/kgDOM+6ug/kgLRH-A2时，获产率为62.5%。李瑞伟等[9]对吉富罗非鱼(O.niloticus)进行了人工催产试验，认为3 000IU/kgHCG+15ug/kgLRH-A2+9mg/kgDOM的催产效果最佳，获产率达66%左右。Fernandes等[10]比较了几种单一催产激素(PE、HCG、GnRH)对尼罗罗非鱼卵母细胞成熟与排卵效果，发现HCG诱导效果最佳，剂量为1 000～5 000IU/kg时，均能产生有效诱导。在此基础上，本试验室根据催产后血清类固醇激素(GnRH、GTH、E2、P)水平变化特征，筛选了尼罗罗非鱼的最佳催产激素组合及剂量[11]，并在尼罗罗非鱼繁殖生产期开展催产激素注射试验，评估混合催产激素对尼罗罗非鱼繁殖产卵的影响，验证其实际生产效果，以期为尼罗罗非鱼人工繁殖技术与应用积累资料。

1　材料与方法

1.1试验材料

尼罗罗非鱼亲鱼取自上海海洋大学罗非鱼种质资源试验站，1龄，体重为140～300g。催产时间为2015年5月30日—7月19日，每隔15天左右进行一次催产试验，共进行4次。催产前，通过挤卵、精子观察法，挑选性腺发育较好的雌、雄鱼各20尾，按雌雄比1：1分别放养在两个2m×2m×1.5m网箱中，每个网箱10组亲鱼。试验期间水温为21～29℃，pH为6.3～7.6，日投饵量为鱼体重的5%左右。促黄体素释放激素A2(LRH-A2)、绒毛膜促性腺激素(HCG)、地欧酮(DOM)均购自于宁波第二激素厂。

1.2试验方法

1.2.1获产率试验

试验分成试验组和对照组，采用一次注射法，胸鳍基部注射；试验组注射催产激素剂量为9mg/kgDOM+15ug/kgLRH-A2+3 000IU/kgHCG，每尾雌鱼的注射量控制在1mL左右，雄鱼不注射；对照组注射相同剂量的生理盐水。催产后72h第一次检测含卵雌鱼个数，之后每隔24h检测1次，144h为最后一次检测。

1.2.2卵子形态发育观察

7月20日，挑选雌鱼10尾进行催产，另挑选10尾作为对照组注射相同剂量的生理盐水，试验组和对照组均无雄鱼。催产前(0h)及催产后72h，每隔24 小时用人工方法挤出少量卵子保存于0.7%生理盐水中，用OLYMPUS-SZX7解剖镜观察拍照。

2　结果与分析

2.1催产效果

从5月30日到7月19日进行的4个批次催产结果见表1。试验组4次催产后的雌鱼获产率分别为60%、60%、60%、50%，对照组获产率为30%、20%、30%、30%。试验组平均获产率显著高于对照组(P<0.05)。试验组产卵时间多在72h内完成，对照组产卵时间、范围较分散。

表1　激素催产后尼罗罗非鱼雌鱼含卵尾数

2.2卵子的质量鉴别

催产前、后通过人工挤卵获得的卵子形态见图1。未成熟卵子表面有少量血丝，卵黄较为明显、充满，长径为1.7～2.4mm，短径为0.5～1.8mm；成熟卵子呈鸭梨形、黄褐色，卵黄颗粒大而饱满，长径为1.8～2.7mm，短径为0.6～1.8mm；过熟卵子呈椭圆形，或不规则，卵黄颗粒液化，卵径减小，动、植物极两端变白，表层布满黑色斑点，轻碰卵子即破裂。

催产后各时间点成熟雌鱼情况见表2。催产后72h时，试验组有4尾雌鱼卵子发育成熟或过熟，对照组有2尾雌鱼成熟或过熟。催产后96h，对照组有1尾雌鱼成熟。催产后120h，试验组有1尾雌鱼成熟；144h，试验组、对照组均无成熟期雌鱼。

注：①未成熟卵，②成熟卵，③过熟卵。

Notes：①immatureeggs，②matureeggs，③overripeeggs.

表2　催产后各时间点尼罗罗非鱼成熟发育

3　讨论

早期开展的鱼类人工繁殖研究试验中，多数学者使用单一人工催产激素进行人工催产试验研究，如鲤鱼垂体[12]、HCG[13]、GnRH以及GnRHa[14]。由于罗非鱼性腺发育的特殊性，对人工催产激素具有不敏感性，单一催产激素、低剂量均对罗非鱼人工繁殖未能产生明显效果。本研究利用前期筛选出的催产激素种类及剂量9mg/kgDOM+15ug/kgLRH-A2+3 000IU/kgHCG，在实际生产中对尼罗罗非鱼进行了催产试验，试验组平均获产率达57.5%，对照组平均获产率27.5%；试验组含卵时间集中在72h内完成，对照组含卵时间无明显集中时间，说明DOM+LRH-A2+HCG激素组合对尼罗罗非鱼产卵产生了较明显的影响，能有效提高尼罗罗非鱼获产率。尼罗罗非鱼属于一年多次产卵型鱼类，性腺发育不同步，催产效率明显低于同步产卵型鱼类，而且效应时间也大于同步产卵型鱼类，如“四大家鱼”等获产率都能达到90%以上，效应时间一般在10～28h之间。本试验中，催产组的实际获产率也低于之前的奥利亚罗非鱼、吉富罗非鱼催产试验结果[8-9]，奥利亚罗非鱼催产亲本体重为150～750g，实际年龄组为1～3龄，吉富罗非鱼人工催产试验中水温条件达27～30℃，因此，罗非鱼人工催产时间效率还受种间差异、亲鱼年龄、性腺发育、试验水温等因素的共同影响。

催产前的卵子表面有少量血丝，卵黄几乎充满细胞质，属于未成熟期。催产后，卵子呈鸭梨状，卵黄充满整个细胞质，卵径达到最大，为卵细胞的成熟期[15]。随时间推移，部分卵细胞动、植物极开始变白，卵径减小，处于过熟期；之后，卵子呈不规则形状、白色，卵黄开始液化，表层出现黑色斑点。本试验中，催产后72h，试验组40%的雌鱼达到或超过成熟期，对照组20%雌鱼达到或超过成熟期；催产后96～120h，试验组、对照组各有10%雌鱼发育成熟，这与实际催产试验中雌鱼含卵比例与含卵时间的结果基本一致，从卵子形态发育角度验证了催产试验效果。

由于尼罗罗非鱼个体性腺发育不同步性，催产前，应对雌鱼进行严格挑选，这也是催产试验的关键步骤。催产过程中，要轻拿轻放，防止亲鱼受强烈刺激后产生较大应激反应，影响催产效果。