抗菌药物敏感性试验（AST）简称药敏试验（或耐药试验），旨在了解病原菌对各种抗生素的敏感（或耐受）程度，以指导药物治疗中合理选用抗生素药物的微生物学试验。某种抗生素如果能以很小的剂量抑制、杀灭致病菌，则称该种致病菌对该抗生素“敏感”。反之，则称为“不敏感”或“耐药”。为了解致病菌对哪种抗生素敏感，以合理用药，减少盲目性，就应该进行对致病生物进行药敏试验。

致病菌的药敏试验大致过程是：从患体的感染部位（病灶）采取含致病菌的标本，接种在适当的培养基上，于一定条件下纯化培养菌株。如果采用纸片琼脂扩散法（K-B法）完成药敏试验，就可将分别沾有一定量各种抗生素的纸片，贴在培养基表面或用不锈钢圈，内放定量抗生素溶液，培养一定时间后观察抑、杀菌结果。由于致病菌对各种抗生素的敏感程度不同，在药物纸片周围便会出现不同大小的抑制致病菌生长而形成的“空圈”，称为抑菌圈。抑菌圈大小与致病菌对各种抗生素的敏感程度成正比关系。因此，可以根据药敏试验结果有针对性地选用抗生素。

目前常用的药敏试验方法有：纸片琼脂扩散法（K-B法）、稀释法、E试验、检测细菌耐药性的方法。稀释法又可分为液体稀释法和琼脂稀释法。在人医和兽医方面，检测细菌耐药性的方法还包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的检测、耐万古霉素肠球菌（VER）的检测、耐青霉素肺炎链球菌（PRP）的检测、超广谱β-内酰胺酶（ESBL）的检测和β-内酰胺酶的检测。

对于水生动物致病菌药敏试验主要采用纸片琼脂扩散法（K-B法）和稀释法进行。本文以稀释法为例作简要介绍，仅供参考。

接上期：鱼病致病菌药物敏感性的常用测定(上)：纸片琼脂扩散法

液体培养基稀释法

液体培养基稀释法适用于需氧及兼性厌氧的快速生长型致病菌，比如肠杆菌科、葡萄球菌属和肠球菌属；嗜血杆菌属、奈瑟菌属、肺炎链球菌及其他链球菌等菌株，还适用于厌氧菌、酵母样真菌及支原体等。

根据每种药物（根据药物的性质不同，按照表2的方法进行稀释）、致病菌种类和感染部位的不同，选择不同的抗生素浓度稀释范围，用M-H肉汤以2n进行倍比稀释抗菌药物（比如256、128、64、～0.125……）。

将稀释后的药物加入试管，或加入冷却至45～55℃ M-H培养基中，立即在无菌条件下制作系列药物浓度梯度的药敏试验试管（图2）。

(图2 试管内药敏试验的试管内药物添加方法，仿日本化学疗法学会，1975）

用无菌生理盐水或M-H肉汤培养基，将菌液配置成106个/mL浓度的菌悬液。在配制好的含药浓度梯度液体培养基试管中加入上述供试致病菌的菌悬液。制备好的药物敏感测试试管放置于培养温度为28℃条件下（注意根据致病菌的特性选择培养适宜温度），培养一定的时间后，再观察试验结果。

液体培养基稀释法获得的是供试药物对致病菌的最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）。MIC的判读即为肉眼观察无致病菌生长试管中的最低药物浓度，为该该供试药物的MIC。MBC的判读即为供试药物杀灭99.9%或以上受试致病菌所需的最低浓度。具体做法是将高于MIC 1～3个稀释度的试管中的培养液，转接种于相应的培养基平皿上，在28℃恒温条件下培养18～24小时，与无致病菌生长的平皿对应的药敏试管中的药物浓度，即判为杀灭99.9%或以上受试菌所需的MBC。

如果选用的抗菌素对某种致病菌没有抑制作用，使用后就不可能获得对疾病的治疗效果。然而，即使某种抗菌素能抑制某种致病菌，不同的致病菌对同一种抗菌素的感受性也是存在差异的。因此，为了达到药到病除或者获得对疾病比较好的治疗效果，筛选病原菌敏感的抗菌素作为治疗养殖鱼类疾病的药物是很有必要的。现在，研究者们采用在养殖现场分离到的养殖鱼类致病菌进行药物敏感性试验时，已经发现有些菌株对某些抗菌素失去了敏感性，或者感受性已经下降了，这就是因为病原菌对这些抗生素产生了抗药性。

病原菌对药物的感受性一般都是采用最小抑菌浓度（MIC）表示。即每升（L）培养基中的抗菌药物以毫克（mg）表示，作成倍比稀释系列，当接种在培养基中的病原菌被完全抑制的最低药物浓度，即为表示药物对致病菌菌株的最小抑菌浓度。

测定从患病养殖鱼类中分离病原菌对各种抗菌药物的敏感性，是保证药物治疗效果的关键。但是，开展这个工作要求有一定的试验条件，而且要求操作者具备一定的专业知识和试验技能，因此，尚不具备这种试验条件的养殖单位和个人可以委托有条件的研究单位协助完成这项工作。

对水生动物致病菌的药敏试验结果，不仅可为科学地选择治疗药物提供重要参考，避免渔用药物的滥用或者误用，而且通过监控病原菌的耐药性变迁，还可用于评价研制渔用药物中新药的抗菌谱和抗菌活性等药效学特征。目前，在水生动物疾病防控中滥用抗生素的现象比较普遍，致使抗药致病菌急剧增加，甚至因长期大量使用广谱抗生素，大量杀伤了水生动物体内正常微生物，失去微生物的相互制约作用，从而使一些少见的或一般情况下的非致病菌大量繁殖，引起所谓“二次感染”的情况屡有发生，给药物治疗水生动物感染性疾病造成人为的困难。因此，在水产养殖中提倡对水生动物致病菌进行药敏试验，对于做到精准用药和坚持合理用药是十分重要的。

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致谢作者：孟思妤，孟长明，陈昌福。
备注：西南渔业网对内容略有修改并配图。

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