苦参方剂对池塘轮虫、剑水蚤、库蚊幼虫和蓝彩鳉鱼的急性毒性试验

田海军 彭新亮

(信阳农林学院水产科学系，河南信阳 464000)

中草药是中国医药的瑰宝。它具有毒副作用小、价格低廉、不易产生抗药性优点，且其中的某些药物成分不仅有抗菌作用，还具免疫作用，能改善机体的免疫状态，提高机体自身的抗菌防病能力，所以进一步开展中草药在水产养殖上的应用研究成为必然趋势［4－5］。苦参方剂由苦参、苦楝、百部、贯众、青蒿、黄柏、茯苓几味药组成，是信阳农业高等专科学校水产系水产病害实验室研究开发出来的防治鱼类车轮虫、指环虫病等寄生虫病的新型环境友好型渔药，是复方中草药渔业杀虫剂，其剂型为水乳剂和水分散粒剂。

本研究初步评价了苦参方剂对蓝彩鳉鱼、库蚊幼虫、剑水蚤和轮虫(臂尾种)的毒性。

1 材料与方法

1.1 测试生物

轮虫在实验室经过纯培养获得(Lubzens，1987年)。剑水蚤在敞开的400 L的金属容器中通过添加家禽的粪便对其进行产能性刺激而获得(Wade和Stirling，1999)。库蚊幼虫在敞开的金属容器中通过收集库蚊的卵，然后让其在体积为1 L的透明玻璃容器中孵化获得，待其生长到第2龄期后做生物测验。蓝彩鳉鱼用20 L的球状塑料容器从废弃的池塘收集装载到实验室，在19℃用脱氯的自来水驯养两周(溶解氧为8.20 mg/L，pH 值为6.7)，驯养期间每天用蚊子幼虫喂食，生物活性测试的8 h和18h之前进行暴露处理。

1.2 生物测定

以苦参方剂在可再生的静态系统进行48h生物活性急性毒性试验(OECD，1981)。贮存液分别被稀释配制成以下系列浓度:10.0，5.0，2.5，1.25，0.625，0.312和0.156 mg/L，而对蚊子幼虫生物活性测定配制成以下浓度:40.0，20.0，10.0，5.0，2.5，1.25和0.625 mg/L。

对轮虫的生物活性测定在25 mL 玻璃标本瓶中进行。从纯培养中取含有1 mL 轮虫的水进行接种，每个处理浓度设3次重复。为了测定每个重复的死亡率，对处理液充分搅拌后，用3个1 mL胰岛素注射器等分收集，然后倒入1 mL的计数腔中，把计数腔安装在一个低功耗显微镜下观察，计数器计数和记录死亡率。分析每处理每重复浓度的平均死亡率之间的显著性差异。当轮虫纤毛运动停止认为已经死亡。

剑水蚤生物活性测定在100 mL的玻璃杯中进行。每个处理均设置重复浓度，而且用1 mL 注射器接种10只剑水蚤。设定呼吸心跳停止为死亡，通过立体显微镜观察剑水蚤的死亡情况。记录每个重复处理浓度的平均死亡率，对其进行显著性差异分析。

对库蚊幼虫的生物活性测定在100 mL 容量的玻璃杯中进行，与剑水蚤的操作相同，幼虫停止跳动即认为其为死亡。

蓝彩鳉鱼的生物活性测试在10 L 玻璃鱼缸中进行。每个鱼缸内鱼的平均长度为(4.5 土1.2)cm，平均体重为(2.7 士0.5)g。每个处理浓度设重复。当蓝彩鳉鱼运动停止或尾巴摆动停止和不再对机械刺激起反应时认为其死亡(触摸)。观察到有死鱼时即将其移出玻璃缸。对各处理各重复死亡率的方差进行显著性差异分析。

水质参数由生物测定试验的初末决定(见表1)。水的溶解氧、总碱度和总硬度由APHA 法确定(1985年)。pH 值由菲利普斯PW9418 型pH计测定。使用水银温度计测定水温。48h的LC50回归分析和相关系数使用Microsoft Excel Office 2003 进行分析。

2 结果

由所有测试生物的概率曲线确定山毛豆水提物对测试生物体的48h的LC50值。死亡率的概率值与Sprague(1970，1971)描述生物测试的浓度对数值相反。

轮虫的线性回归方程Y=18.29－3.84X，是由生物活性测定死亡率概率回归分析得出的。48h的LC50为2.89 mg/L，相关系数为－0.833(P=0.0199)。卡方检验表明，观察值和预测值没有显著性差异(P＞0.05)。各个处理重复之间也无显着性差异，方差远小于F0.05。

对库蚊幼虫活性的死亡率线性回归方程为Y=3.58 +2.35X。由方程得出48h的LC50为4.48 mg/L。相关系数为0.844(P=0.016 9)。卡方检验表明，观察和预测的概率值间(P＞0.05)无显著性差异。与方差变异率一样，方差分析表明各处理重复浓度间也无显著性差异，且值远远小于F0.05。

苦参方剂对蓝彩鳉鱼的死亡率模型，其线性回归方程为Y=1.45 +1.50X。观察和预测值的相关系数为0.724(P=0.0659)。48h的LC50为9.232 mg/L。卡方检验表明(P＞0.05)观察和预测的概率值无显著性差异，在各处理浓度重复间死亡率无显著性差异，与方差率类似，均小于F0.05。

3 讨论

池塘通常会有生物体，如昆虫、两栖类和爬行类，以及杂鱼和肉食性鱼类。本文中苦参方剂对鱼急性毒性试验48h的LC50为9.232mg/L，这表明它的毒性很低。库蚊幼虫对苦参方剂不敏感，48h半致死浓度为4.48 mg/L，该值相对较高。这可能是由于库蚊幼虫呼吸的是大气(Ukoli，1984;Segun，1989)，这减少机体吸收水提物概率的缘故。该研究中苦参方剂对水生生物的毒性比其他已研究的渔用中草药对水生生物的毒性低。Chen等(1996年)报道了皂甙对日本小对虾48h的LC50为2.82 mg/L。Saha和Kaviraj(1996)报道了花金鸡纳树皮中单宁酸对库蚊96h的LC50为5.5 mg/L。Onusiriuka和Ufodike(1994)报道了Blighia Sapida和Kigelia africana 树皮提取物对非洲鲶鱼96h的LC50分别为8.32 mg/L和6.92 mg/L。Beal和Anderson (1993)报道了使用鱼藤酮消除池塘水体中的所有浮游动物后，需要l～8个月的时间浮游动物群落才恢复到应用鱼藤酮前的水平。30 d 后剑水蚤出现，而45 d 后轮虫也开始重新出现。Calow(1992)认为，实验室的条件与自然条件是有误差的，通过引入安全系数可以修补该误差，从而估计LC50将达到10。

该研究表明，苦参方剂与其他水生生物相比对鱼毒性很低。应该推广其在天然水体中的应用。

表1 48h暴露期测定的平均水质参数