刘家星，陈霞，陈健，欧阳萍，陶丽竹，李良玉，魏文燕，杨马，唐洪，张小丽

(1.成都市农林科学院，四川 成都 611130；2.四川农业大学鱼病研究中心，四川 成都 611130)

一、基本情况

1.养殖情况

本次发病区域位于成都市新津区集中连片养殖池塘，发病池塘主要养殖品种为鲤、鲫，养殖池塘水域面积大小不一，集中连片区域池塘总面积1 000余亩。本次选取发病较为严重的1个养殖户池塘，兼顾周边养殖场。该养殖户的养殖池塘面积为40亩，水源为自然降水、地下水以及湿地沉降水。通过现场观察，池塘水体较为清澈，无漂浮物，在饵料台附近可见少许漂浮油膜，水面散在性漂浮病死鱼；增氧机处于常开状态。

2.水质检测

水质检测时间为14时左右，使用采水器取水面下15厘米水体。池塘水温10.3℃、溶氧8.8毫克/升、pH 8.04、氨氮1.2毫克/升、亚硝酸盐0.05毫克/升，氨氮和亚硝酸盐含量偏高。

3.发病情况

该养殖区域从2021年12月起陆续出现发病情况，最初以鲤鱼为主，后期扩散至鲫鱼养殖池塘。根据部分养殖户反馈，最早发现的病例在成都市蒲江县流水养殖池塘。据了解，本区域内养殖鲤、鲫苗种均购自蒲江一带苗种繁育场，草鱼购自广东一带苗种繁育场。

该养殖户主要养殖品种为鲤、鲫，搭配鲢、鳙和草鱼。鲤、鲫均为当年苗种，购自蒲江一带苗种繁育场，放养大规格苗种5 000尾/亩。2022年1月底该养殖户进行了1次拉网捕鱼，拉网后池塘未进行消毒和采取其他措施。2月初池鱼开始发病，初期每天死亡几尾，后期发展至10～15千克，发病最高期日死亡量达150千克左右。发病个体大小不一，死亡个体鲤均重在600克左右、鲫在400克左右，发病趋势呈现出典型的“急、快、广、高”。在进出水口附近可观察到病死鱼沉在池底，部分浅水区域可见病鱼在池底呆滞不动或漂浮于水体中，对惊吓不敏感。

二、解剖学观察

选取典型发病鲤、鲫进行观察，鲤体表多见散在充血、出血(图1a)，鳃盖前段出现1个较大创口，边缘溃疡发白，鳃盖充血、出血(图1b)，鳍条及基部充血、出血(图1c)，腹部可见大范围充血、出血(图1d)，肛门红肿，鳞基部充血、出血、松动易落，有竖鳞现象(图1e)，鳃丝严重充血(图1f)，血液凝固性变差，易溶血；鲫的口部周围严重充血、出血，并伴有吻部溃烂(图1g)，鳃盖周边可见散在分布溃疡灶，体表偶见充血、出血点位，鳃丝严重充血(图1h)，鳞松动易落。

现场剖解，鲤未见腹水，精巢发育约Ⅲ期，未见出血点(图1i)，腹膜上有散在出血点，肾脏肿大、易碎，脾脏肿大、发黑、质地较脆，胆囊充盈呈墨绿色，肝脏肿大、易碎、有典型的放射形丝状样(花斑)，肠道未见食物、黏液较多、内壁有散在出血点；鲫卵巢发育约为Ⅳ期，卵巢膜明显充血，鳔上可见散在出血点，肾脏肿大、易碎，脾脏肿大、发黑，质地较脆，胆囊充盈呈墨绿色，肝脏肿大、易碎，肠道未见食物、黏液较多，内壁有散在充血、出血点。

图1 患病鲤、鲫典型病变

三、病原学检测及结果

1.寄生虫

制作病鱼体表黏液涂片、鳃丝压片、肠黏液涂片、肠黏膜刮片以及血液涂片，在显微镜下分别观察，均未发现寄生虫，排除寄生虫感染的可能性。

2.细菌

无菌操作下从病鱼肝、脾、肾取样接种BHI平板，培养后观察发现，在接种的平板上长出圆形、边缘光滑、中央凸起的黄白色优势菌落；对优势菌落进行革兰氏染色观察，结果显示分离所得的优势菌均为革兰氏阴性杆菌，且均为散在排列的短杆状菌体(图2)；对细菌分离纯化，共得到3株菌株，分别编号为1S、2G和L2S。

图2 分离菌株革兰氏染色

对纯化后的菌株进行16S rRNA检测，测序结果在GenBank上进行Blast比对。结果发现，1S序列与温和气单胞菌(Aeromonas sobria)序列相似性达97.31%，2G序列和L2S序列与腐希瓦氏菌(Shewanella putrefaciens)序列相似性达97.91%和98.52%。对分离到的3个菌株进行药物敏感性试验结果见表1。

表1 分离菌株药物敏感性试验结果

3.病毒

根据病鱼的病变特征，进行鲤、鲫常见病毒病的PCR检测。电泳结果显示，空白对照无条带，阳性对照均有条带，被检测样品CEV、KHV、SVCV均无条带出现，判定为CEV、KHV、SVCV阴性。

四、治疗建议

1.尽快捕捞死鱼

死亡及濒死鱼要统一收集，待相关保险定损人员确定后实施无害化处理，减少进一步交叉传播的可能性。

2.减少日常投喂

根据发病情况减少日常投喂量，首先降低因过量采食对患病鱼造成的负担，其次降低未被摄入的饲料对水体造成影响的风险。

3.饵料中适当加入植物多糖制剂

拌料投喂黄芪多糖等，以增强鱼体的免疫力。不可使用高刺激性杀虫和消毒药物，不得随意使用抗生素等药物盲目治疗。

4.适时开增氧机

根据水体溶氧情况开增氧机，不需要全天开启，以开四周增氧机为宜。

5.内服外消

在条件允许的情况下，每天向池塘加注少量新鲜、干净的活水。外用含氯消毒剂全池泼洒，根据药敏试验，用氟苯尼考拌料投喂5～7天，使用剂量按照使用说明书。

五、讨论

暴发性出血病在鲤科鱼中较为常见，表现为体表多部位或体内多器官充血、出血。引起鲤、鲫出血病的病因有多种，较为常见的为病毒和细菌以及二者的混合感染。本例分离得到温和气单胞菌和腐败希瓦氏菌两种细菌，提示引起本次鲤、鲫暴发性出血病的病因为细菌感染，而非病毒感染所致。

腐败希瓦氏菌在水产品加工与贮藏相关领域报道较多，少有报道其作为病原菌感染鱼类。但有相关研究显示，腐败希瓦氏菌是一种人畜共患病原菌，可引起人类软组织感染、心膜炎等。温和气单胞菌是一种淡水养殖中的常见致病菌，该菌可引起鱼类出血病和溃疡病等，其危害程度与嗜水气单胞菌相当。

值得注意的是，本次调查区域发病前，在苗种购买地也出现过类似发病情况，不排除苗种携带病原的可能性。由于诱发水生动物疾病的因素由宿主、环境和病原共同决定，在调查过程中发现养殖池塘水体氨氮和亚硝酸盐含量偏高，加之发病期间气温变动频繁，这可能造成鱼处于应激状态，抵抗疾病能力下降，最终诱发疾病。